वायरस न्यूक्लिक एसिड का पता लगाना

अधिकांश विषाणुओं के जीनोमिक अनुक्रम ज्ञात हो चुके हैं।न्यूक्लिक एसिड जांच जो डीएनए के छोटे खंड हैं जिन्हें पूरक वायरल डीएनए या आरएनए खंडों के साथ संकरण करने के लिए डिज़ाइन किया गया है।पोलीमरेज़ चेन रिएक्शन (पीसीआर) वायरल डिटेक्शन के लिए एक अधिक कुशल तकनीक है।उच्च थ्रूपुट निदान विधियों को हाल ही में विकसित किया गया है।

ए न्यूक्लिक एसिड संकरण तकनीक

न्यूक्लिक एसिड संकरण, मुख्य रूप से दक्षिणी सोख्ता (दक्षिणी) और उत्तरी सोख्ता (उत्तरी) सहित, वायरस निदान क्षेत्र में एक तेजी से विकसित होने वाली नई तकनीक है।संकरण परख का औचित्य डीएनए के छोटे खंडों (जिसे "जांच" कहा जाता है) का उपयोग पूरक वायरल डीएनए या आरएनए खंडों के साथ संकरण करने के लिए किया गया है।गर्म या क्षारीय उपचार द्वारा, डबल-स्ट्रैंडेड लक्ष्य डीएनए या आरएनए को एकल स्ट्रैंड में अलग किया जाता है और फिर एक ठोस समर्थन पर स्थिर कर दिया जाता है।उसके बाद, जांच को जोड़ा जाता है और लक्ष्य डीएनए या आरएनए के साथ संकरित किया जाता है।चूंकि जांच को आइसोटोप या गैर-रेडियोधर्मी न्यूक्लाइड के साथ लेबल किया जाता है, लक्ष्य डीएनए या आरएनए को ऑटोरैडियोग्राफी या बायोटिन-एविडिन सिस्टम द्वारा पता लगाया जा सकता है।चूंकि अधिकांश वायरल जीनोम को क्लोन और अनुक्रमित किया गया है, इसलिए नमूने में जांच के रूप में वायरस-विशिष्ट अनुक्रमों का उपयोग करके उनका पता लगाया जा सकता है।वर्तमान में, संकरण विधियों में शामिल हैं: डॉट ब्लॉट, कोशिकाओं में स्वस्थानी संकरण में, डीएनए सोख्ता (डीएनए) (दक्षिणी धब्बा) और आरएनए सोख्ता (आरएनए) (उत्तरी धब्बा)।

बी.पीसीआर प्रौद्योगिकी

हाल के वर्षों में, पीसीआर के आधार पर इन विट्रो न्यूक्लिक एसिड एम्प्लीफिकेशन तकनीकों की एक श्रृंखला विकसित की गई है, ताकि असंवेदनशील या अनुपयोगी वायरस का परीक्षण किया जा सके।पीसीआर एक ऐसी विधि है जो इन विट्रो पोलीमरेज़ प्रतिक्रिया द्वारा विशिष्ट डीएनए अनुक्रम को संश्लेषित कर सकती है।पीसीआर की प्रक्रिया में तीन चरणों का एक थर्मल चक्र शामिल है: विकृतीकरण, एनीलिंग और विस्तार उच्च तापमान (93 ℃ ~ 95 ℃) पर, डबल-फंसे डीएनए को दो एकल डीएनए स्ट्रैंड में विभाजित किया जाता है;फिर कम तापमान (37 ℃ ~ 60 ℃) पर, दो संश्लेषित न्यूक्लियोटाइड प्राइमर पूरक डीएनए खंडों की घोषणा करते हैं;जबकि टाक एंजाइम (72 ℃) के लिए उपयुक्त तापमान पर, नई डीएनए श्रृंखलाओं का संश्लेषण प्राइमर 3'एंड से शुरू होता है जिसमें पूरक डीएनए को टेम्प्लेट और एकल न्यूक्लियोटाइड को सामग्री के रूप में उपयोग किया जाता है।इसलिए प्रत्येक चक्र के बाद, एक डीएनए श्रृंखला को दो श्रृंखलाओं में प्रवर्धित किया जा सकता है।इस प्रक्रिया को दोहराते हुए, एक चक्र में संश्लेषित प्रत्येक डीएनए श्रृंखला को अगले चक्र में टेम्पलेट के रूप में इस्तेमाल किया जा सकता है, और प्रत्येक चक्र में डीएनए श्रृंखलाओं की संख्या दोगुनी हो जाती है, जिसका अर्थ है कि पीसीआर का उत्पादन 2n लॉग गति में बढ़ाया जाता है।25 से 30 चक्रों के बाद, वैद्युतकणसंचलन के माध्यम से पीसीआर के उत्पादन की पहचान की जाती है, और विशिष्ट डीएनए उत्पादों को यूवी प्रकाश (254 एनएम) के तहत देखा जा सकता है।विशिष्टता, संवेदनशीलता और सुविधा के लाभ के लिए, एचसीवी, एचआईवी, सीएमवी और एचपीवी जैसे कई वायरल संक्रमणों के नैदानिक ​​निदान में पीसीआर को अपनाया गया है।चूंकि पीसीआर बहुत संवेदनशील है, यह एफजी स्तर पर वायरस डीएनए का पता लगा सकता है, झूठी सकारात्मक से बचने के लिए ऑपरेशन बहुत सावधानी से किया जाना चाहिए।इसके अलावा, न्यूक्लिक एसिड परीक्षण में सकारात्मक परिणाम का मतलब यह नहीं है कि नमूने में जीवित संक्रामक वायरस है।

पीसीआर तकनीक के व्यापक अनुप्रयोग के साथ, विभिन्न परीक्षण उद्देश्यों के लिए पीसीआर तकनीक के आधार पर नई तकनीकों और विधियों का विकास किया जाता है।उदाहरण के लिए, वास्तविक समय मात्रात्मक पीसीआर वायरल लोड का पता लगा सकता है;स्वस्थानी पीसीआर का उपयोग ऊतक या कोशिकाओं में वायरस के संक्रमण की पहचान करने के लिए किया जाता है;नेस्टेड पीसीआर पीसीआर की विशिष्टता को बढ़ा सकता है।उनमें से, वास्तविक समय मात्रात्मक पीसीआर को और अधिक तेजी से विकसित किया गया है।कई नई तकनीकों, जैसे कि ताकमान हाइड्रोलिसिस जांच, संकरण जांच, और आणविक बीकन जांच, को वास्तविक समय मात्रात्मक पीसीआर तकनीक में जोड़ा गया है, जिसका व्यापक रूप से नैदानिक ​​अनुसंधान में उपयोग किया जाता है।मरीजों के शरीर के तरल पदार्थ में वायरल लोड की सही पहचान करने के अलावा, इस पद्धति का उपयोग दवा-सहिष्णु उत्परिवर्ती का पता लगाने के लिए भी किया जा सकता है।इसलिए, वास्तविक समय मात्रात्मक पीसीआर मुख्य रूप से उपचारात्मक प्रभाव मूल्यांकन और दवा सहिष्णुता निगरानी में लागू होता है।

सी. वायरल न्यूक्लिक एसिड की उच्च-थ्रूपुट पहचान

नए आकस्मिक संक्रामक रोगों के तेजी से निदान की जरूरतों को पूरा करने के लिए, डीएनए चिप्स (डीएनए) जैसी विभिन्न उच्च-थ्रूपुट पहचान विधियों की स्थापना की गई है।डीएनए चिप्स के लिए, विशिष्ट जांच को संश्लेषित किया जाता है और डीएनए जांच माइक्रोएरे (डीएनए) बनाने के लिए बहुत उच्च घनत्व में छोटे सिलिकॉन चिप्स से जुड़ा होता है जिसे नमूने के साथ संकरित किया जा सकता है।संकरण के संकेत को कन्फोकल माइक्रोस्कोप या लेजर स्कैनर द्वारा चित्रित किया जा सकता है और कंप्यूटर द्वारा आगे संसाधित किया जा सकता है और विभिन्न जीनों से संबंधित विशाल डेटा सेट प्राप्त किया जा सकता है।डीएनए चिप दो तरह की होती है।"संश्लेषण चिप" इस प्रकार है: विशिष्ट ऑलिगोन्यूक्लियोटाइड्स सीधे चिप्स पर संश्लेषित होते हैं।एक और डीएनए पूल चिप है।क्लोन किए गए जीन या पीसीआर उत्पादों को स्लाइड पर व्यवस्थित रूप से मुद्रित किया जाता है।डीएनए चिप प्रौद्योगिकी का लाभ एक साथ बड़ी मात्रा में डीएनए अनुक्रमों का पता लगाना है।पैथोजन डिटेक्शन चिप का नवीनतम संस्करण एक बार में 1700 से अधिक मानव वायरस की पहचान कर सकता है।डीएनए चिप प्रौद्योगिकी ने पारंपरिक न्यूक्लिक एसिड संकरण विधियों की समस्याओं को हल किया और वायरल निदान और महामारी विज्ञान के अध्ययन में बहुत व्यापक अनुप्रयोग हैं।